前言
Tebentafusp是一款TCR/CD3雙特異融合蛋白藥物,靶向gp100表達(dá)的腫瘤,同時是首款以T細(xì)胞受體為骨架的大分子藥物。根據(jù)Immunocore和Adaptimmune披露Tebentafusp的臨床前的研究資料文獻(xiàn),筆者梳理了α-CD3為骨架的雙特異藥物需要進(jìn)行臨床前體外試驗,以及以人的免疫細(xì)胞為核心的,種屬特異性的體外試驗對首次人體試驗安全劑量的選擇的重要指導(dǎo)意義,討論臨床前以人免疫細(xì)胞的體外試驗?zāi)P腿〈窍嚓P(guān)動物模型進(jìn)行安全性、有效性評估和安全劑量預(yù)測的范式轉(zhuǎn)移的可行性,梳理臨床前體外試驗包的主要內(nèi)容。
Tebentafusp臨床前體外試驗
隨著CTLA-4抗體, PD1/PDL1抗體,CART和CD3 based雙特異藥物在近10年不斷獲批上市并廣泛應(yīng)用腫瘤治療領(lǐng)域,腫瘤免疫療法已成為新的藥物研發(fā)的范式,不斷有腫瘤免疫相關(guān)的新靶點(diǎn),新藥物形式實體從臨床前進(jìn)入臨床。在腫瘤免疫治療藥物研發(fā)迅猛發(fā)展的同時,也暴露出了一些風(fēng)險,其中影響比較深遠(yuǎn)的是采用不合適的臨床前的藥物評估模型無法充分的預(yù)估臨床副作用導(dǎo)致的安全性風(fēng)險。比較典型的案例是抗CD28抗體TGN1412在健康受試者中引起的劇烈的危機(jī)生命的細(xì)胞因子釋放綜合征,CD3/CD19雙抗藥物blinatumomab在病人中發(fā)現(xiàn)的神經(jīng)毒性等。究其原因是目前傳統(tǒng)的臨床前的動物模型用來預(yù)測人來源的免疫調(diào)節(jié)藥物的安全性和有效性并不合適,動物/人的免疫細(xì)胞/免疫蛋白和治療藥物的互作強(qiáng)度存在差異,人來源的治療藥物在動物體內(nèi)會產(chǎn)生抗藥抗體影響到藥代動力學(xué)分布,進(jìn)而影響到安全性和有效性評估。
ICHS6 和 ICHS9 強(qiáng)調(diào)藥物的臨床前研究需要確保藥物在相關(guān)種屬具備藥物活性,如果做不到這點(diǎn),可以考慮體外的方法。已經(jīng)有越來越多案例表明人種屬來源的體外試驗?zāi)軌虍a(chǎn)生有價值的,能夠為體內(nèi)預(yù)測提供有幫助性的結(jié)果,并且在臨床階段選擇最低預(yù)期生物有效水平(Minimal Anticipated Biological Effective Level)的起始濃度非常有指導(dǎo)意義。
以Tebentafusp的臨床前研究數(shù)據(jù)為典型案例,如下圖1 Immunocore和Adaptimmune的 科學(xué)家介紹了在有效性,安全性和特異性方面進(jìn)行評價臨床前的體外方法的測試項。
圖1:臨床前體外試驗測試項
臨床前體外免疫學(xué)試驗包分析
Tebentafusp的臨床前體外免疫學(xué)試驗包總結(jié)下來可分為以下內(nèi)容:
有效性評估-體外人T細(xì)胞激活和殺傷,使用的方法分析
1. 基于人PBMC Tebentafusp介導(dǎo)特異性的腫瘤細(xì)胞殺傷試驗,采用的是LDH釋放殺傷模型, IncuCyte 凋亡檢測模型,結(jié)果間圖2
2. 基于人PBMC和特異性的腫瘤細(xì)胞作用,Tebentafusp介導(dǎo)的T細(xì)胞的激活測定,采用的是ELISPOT檢測IFNγ的T細(xì)胞激活性模型。
圖2:體外腫瘤細(xì)胞殺傷試驗結(jié)果
通過細(xì)胞殺傷試驗中Tebentafusp梯度稀釋的劑量結(jié)果,確定Tebentafusp在1pM-1nM的范圍內(nèi)有有效的殺傷效果,確定最低預(yù)期生物有效水平為1pM.
安全性評估-體外人T細(xì)胞激活和細(xì)胞因子釋放,使用的方法分析
1. 靶點(diǎn)特異性,非腫瘤特異性的活性測定。主要采用的是不同抗原表達(dá)豐度的腫瘤細(xì)胞,不同捐獻(xiàn)者的黑色素細(xì)胞進(jìn)行對比評估,使用ELISPOT檢測T細(xì)胞的激活進(jìn)行測試,結(jié)果見圖3。Tebentafusp在比較敏感的受試者中藥物濃度達(dá)到1pM-10pM會出現(xiàn)皮膚相關(guān)的副作用,在大部分受試者中10pM-100pM會出現(xiàn)皮膚相關(guān)的副作用,在1nM以上時會丟失特異性。
2. 非靶點(diǎn),非腫瘤特異性的活性測定。主要采用的是在全血中Tebentafusp細(xì)胞因子釋放,檢測上清IL-6, TNF-α,IL-2 and IFNγ,文章沒有描述方法的細(xì)節(jié),筆者認(rèn)為基于TGN1412案例中的方法2,從安全性角度來說,全血的刺激應(yīng)包括,液相刺激,濕法固相刺激和干法固相刺激等模型。
圖3:靶點(diǎn)特異性,非腫瘤特異性的活性測定
基于體外安全性的結(jié)果過大于1nM Tebentafusp會特異性減弱,結(jié)合有效性的檢測數(shù)據(jù),最終確定的臨床劑量擴(kuò)展的范圍在10pM-100pM.
總結(jié)討論:
根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)記載,與非人靈長類動物(NHPs)相比,人類T細(xì)胞激活后,具有更強(qiáng)的增殖反應(yīng)。具體的原因可能是相對于非人靈長類動物,人的CD33相關(guān)的siglec糖蛋白有明顯的下調(diào)。CD33-siglec糖蛋白軸具備抑制T細(xì)胞激活的重要調(diào)節(jié)功能,所以免疫調(diào)節(jié)劑特別是免疫激動劑在非人的靈長類動物模型中,其免疫激活能力將會被低估,使用靈長類動物模型的安全劑量外推到人體用量,有極大的安全性風(fēng)險,這也是CD28超級激動劑在首次人體試驗出現(xiàn)嚴(yán)重的臨床試驗的根本原因。
基于免疫調(diào)節(jié)劑的動物模型的非相關(guān)性,美國先后發(fā)表了An FDA oncology analysis of CD3 bispecific constructs and first-inhuman dose selection,An FDA oncology analysis of immune activating products and first-in-human dose selection兩篇文章推薦使用基于人免疫細(xì)胞的更加具備相關(guān)性的體外試驗?zāi)P偷臋z測結(jié)果進(jìn)行CD3雙抗和免疫激動劑的人體首次用量劑量的外推。具體如圖4
圖4:FDA推薦使用體外的人免疫細(xì)胞試驗的數(shù)據(jù)外推首次人體劑量
熙寧生物臨床前體外免疫學(xué)試驗服務(wù)
熙寧生物有非常豐富的臨床前和臨床階段基于人免疫細(xì)胞的體外有效性和安全性評估的項目經(jīng)驗,建立了多個基于人免疫細(xì)胞的體外受體占位,細(xì)胞免疫殺傷/激活/增殖/細(xì)胞因子釋放試驗?zāi)P?。可為包括CD3 Based雙特異藥物在內(nèi)的免疫調(diào)節(jié)劑提供全套的臨床前體外免疫學(xué)試驗包,服務(wù)臨床前安全性和有效性的評估,助力首次人體臨床試驗的安全有效劑量的選擇。
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1.基于人PBMC的細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞檢測:
2.基于流式細(xì)胞技術(shù)進(jìn)行人全血的T細(xì)胞增殖測定和藥物受體占位測定:
3. 基于ELISPOT平臺藥物作用下激活人PBMC激活的IFNγ檢測
4.基于液相,濕法固相和干法固相刺激模型人PBMC/全血的細(xì)胞因子釋放測定
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